Забуференный фосфатом физиологический раствор или раствор PBS

PBS или физиологический раствор с фосфатным буфером – это буферный раствор, который особенно ценен, поскольку имитирует концентрацию ионов, осмолярность и pH жидкостей человеческого тела. Другими словами, он изотоничен для человеческих растворов, поэтому с меньшей вероятностью вызовет повреждение клеток, токсичность или нежелательное осаждение в биологических, медицинских или биохимических исследованиях.

Химический состав PBS

Существует несколько рецептов приготовления раствора PBS. Эфирный раствор содержит воду, гидрофосфат натрия и хлорид натрия. Некоторые препараты содержат хлорид калия и дигидрофосфат калия. ЭДТА также может быть добавлен в клеточный препарат для предотвращения комкования.

Солевой раствор с фосфатным буфером не идеален для использования в растворах, содержащих двухвалентные катионы (Fe 2+ , Zn 2+ ), потому что могут происходить осадки. Однако некоторые растворы PBS действительно содержат кальций или магний. Также имейте в виду, что фосфат может подавлять ферментативные реакции. Особенно помните об этом потенциальном недостатке при работе с ДНК. Хотя PBS отлично подходит для физиологической науки, имейте в виду, что фосфат в образце с буфером PBS может выпасть в осадок, если образец смешан с этанолом.

Типичный химический состав 1X PBS имеет конечную концентрацию 10 мМ PO 4 3- , 137 мМ NaCl и 2,7 мМ KCl. Вот конечная концентрация реагентов в растворе:

Соль Концентрация (ммоль/л) Концентрация (г/л)
NaCl 137 8,0
KCl 2,7 0,2
Na 2 HPO 4 10 1,42
KH 2 PO 4 1,8 0,24

Протокол приготовления физиологического раствора с фосфатным буфером

В зависимости от вашей цели вы можете подготовить 1X, 5X или 10X PBS. Многие люди просто покупают буферные таблетки PBS, растворяют их в дистиллированной воде и при необходимости регулируют pH с помощью соляной кислоты или гидроксида натрия. Однако сделать решение с нуля несложно. Вот рецепты 1X и 10X физиологического раствора с фосфатным буфером:

добавить (1 ×)

Конечная концентрация (1 ×)

Сумма для добавления (10 ×)

Конечная концентрация (10 ×)

NaCl

8 г

137 мМ

80 г

1. 37 млн ​​

KCl

0,2 г

2,7 мМ

2 г

27 мМ
Na2HPO4

1,44 г

10 мМ

14,4 г

100 мМ
KH2PO4

0,24 г

1,8 мМ

2,4 г

18 мМ

Необязательно:

CaCl2 • 2H2O

0,133 г

1 мМ

1,33 г

10 мМ

MgCl2 • 6H2O

0,10 г

0,5 мМ

1,0 г

5 мМ

  1. Растворите соли реагентов в 800 мл дистиллированной воды.
  2. Отрегулируйте pH до желаемого уровня с соляной кислотой. Обычно это 7,4 или 7,2. Используйте pH-метр для измерения pH, а не pH-бумагу или другой неточный метод.
  3. Добавьте дистиллированную воду, чтобы получить конечный объем 1 литр.

Стерилизация и хранение раствора PBS

Стерилизация не требуется для некоторых приложений, но если вы стерилизуете его, разлейте раствор по аликвотам и автоклавируйте на 20 минут при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (1,05 кг/см 2 ) или используйте стерилизацию фильтром.

Можно хранить физиологический раствор с фосфатным буфером при комнатной температуре. Его также можно хранить в холодильнике, но раствор 5X и 10X может выпадать в осадок при охлаждении. Если вам необходимо охладить концентрированный раствор, сначала храните его при комнатной температуре, пока не убедитесь, что соли полностью растворились. Если осадки все же выпадут, повышение температуры вернет их в раствор. Срок годности охлажденного раствора составляет 1 месяц.

Разбавление 10-кратного раствора для получения 1-кратного PBS

10-кратное концентрирование или запас раствор, который может быть разбавлен до однократного или обычного раствора. 5-кратный раствор необходимо разбавить в 5 раз, чтобы получить нормальное разбавление, а 10-кратный раствор необходимо разбавить в 10 раз.

Чтобы приготовить 1-литровый рабочий раствор 1X PBS из 10X раствора PBS, добавить 100 мл 10X раствора в 900 мл воды. Это изменяет только концентрацию раствора, а не грамм или молярное количество реагентов. На pH не должно влиять.

PBS по сравнению с DPBS

Другой популярный буферный раствор – это фосфатно-солевой буфер Дульбекко или DPBS. DPBS, как и PBS, используется для биологических исследований и буферов в диапазоне pH от 7,2 до 7,6. Его можно хранить при комнатной температуре. Раствор Дульбекко содержит более низкую концентрацию фосфата. Это 8,1 мМ фосфат-иона, в то время как обычный PBS – 10 мМ фосфат. Рецепт для 1x DPBS:

Реагент Количество, которое нужно добавить (1x)
NaCl 8,007 г
KCl 0. 201 г
Na 2 HPO 4 1,150 г
KH 2 PO 4 0,200 г
Необязательно:
CaCl 2 • 2H 2 O 0,133 г
MgCl 2 • 6H 2 O 0,102 г

Растворите соли в 800 мл воды. Отрегулируйте pH до 7,2-76 с помощью соляной кислоты. С помощью воды доведите конечный объем до 1000 мл. Автоклав при 121 ° C в течение 20 минут.

Источники

  • Dulbecco, R .; и другие. (1954). «Зубообразование и выделение чистых линий с вирусами полиомиелита». Дж. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
  • “Физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS.” Cold Spring Harbor Protocols (2006). Лаборатория Колд-Спринг-Харбор.
  • Как приготовить физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS)
  • Как сделать буфер электрофореза 10X TBE
  • Как приготовить раствор фосфатного буфера
  • Как сделать фосфатный буфер
  • Рецепт решения Рингера
  • Буфер для электрофореза 10X TAE
  • Определение буфера в химии и биологии
  • Как найти pOH в химии
  • Как создать буфер TBE за 3 простых шага
  • 0. Рецепт раствора 5 M EDTA
  • Как приготовить буферный раствор Трис для медицинского или лабораторного использования
  • Сделать Буфер TAE за несколько шагов
  • Как подготовить решение
  • Как приготовить обычные кислотные растворы
  • Как сделать буфер цитрата натрия
  • Узнайте pH обычных химических веществ

ол>

Оцените статью
recture.ru
Добавить комментарий