Полиморфизм длины рестрикционного фрагмента (RFLP) – это молекулярный метод генетического анализа, который позволяет идентифицировать людей на основе уникальных паттернов разрезания рестрикционных ферментов в определенных областях ДНК.
Также называемый анализом RFLP, метод использует преимущества полиморфизмов в генетических кодах отдельных людей. Несмотря на то, что все представители вида имеют, по сути, один и тот же генетический состав, эти небольшие различия объясняют вариации фенотипа, такие как внешний вид или метаболизм, между людьми.
Методика RFLP-анализа
Методика RFLP-анализа включает разрезание определенной области ДНК с известной вариабельностью рестрикционными ферментами, затем разделение фрагментов ДНК электрофорезом в агарозном геле и определение количества фрагментов и относительных размеров.
Рестрикционный фермент – это фермент, белковая молекула, которая разрезает ДНК на сайтах рестрикции. По сути, образец ДНК расщепляется и переваривается рестрикционными ферментами. Полученные фрагменты разделяются в соответствии с их длиной, и образец размеров фрагментов будет отличаться для каждого тестируемого человека.
Полный процесс RFLP требует маркировки зонда, ДНК фрагментация, электрофорез, блоттинг, гибридизация, отмывка и авторадиография. Обнаруженный RFLP визуализируется с помощью рентгеновской пленки в авторадиографии, где фрагменты ДНК можно просматривать и анализировать после того, как они отделены друг от друга с помощью электрофореза.
Применение для RFLP Используйте
Некоторые из приложений для RFLP-анализа включают:
- ДНК Снятие отпечатков пальцев: судебно-медицинские эксперты могут использовать RFLP-анализ для выявления подозреваемых на основе образцов улик, собранных на местах совершения преступлений.
- Отцовство: RFLP также используется при определении отцовства или для отслеживания происхождения.
- Генетическое разнообразие: этот метод можно использовать для изучения эволюции и миграции диких животных, изучения моделей размножения в популяциях животных, а также выявления и диагностики некоторых заболеваний.
Техника использования RFLP-определения вариаций в геномах является жизненно важным инструментом в картировании генома и анализе генетических заболеваний. Если местонахождение определенного гена болезни ищется в определенной хромосоме, исследователи будут анализировать ДНК членов семьи с этим заболеванием, а затем искать аналогичные модели наследования в аллелях RFLP.
После того, как ген заболевания локализован, проведение RFLP-анализа на других членах семьи может выявить носителя мутантных генов или сигнализировать об общем риске заболевания. Важно отметить, что метод RFLP не получил широкого распространения в настоящее время, когда в судебной медицине и некоторых других областях используются более новые и надежные методы анализа ДНК..
Отрицательные аспекты RFLP
К сожалению, методика анализа RFLP утомительна и медленна. Помимо требования большого количества образца ДНК – образец обычно должен быть размером около четверти, что относительно велик для образцов ДНК – процесс, от маркировки зонда до промывки и авторадиографии, может занимать до полный месяц для завершения.
Результаты проекта “Геном человека” в значительной степени заменили потребность в RFLP. Проект позволил определить всю последовательность ДНК, обнаруженной в человеческих клетках, человеческом геноме, а также идентифицировать все гены в человеческом геноме.
