5 распространенных красителей для визуализации и окрашивания ДНК

Существует несколько различных красителей, которые можно использовать для визуализации и фотографирования ДНК после разделения материала с помощью гель-электрофореза.

Среди множества вариантов, эти пять Наиболее распространены пятна, начиная с бромистого этидия, который наиболее широко используется. При работе с этим процессом важно знать не только разницу между пятнами, но и присущие им риски для здоровья.

Бромид этидия

Бромид этидия, вероятно, самый известный краситель, используемый для визуализации ДНК. Его можно использовать в гелевой смеси, буфере для электрофореза или для окрашивания геля после его обработки.

Молекулы красителя прикрепляются к цепям ДНК и флуоресцируют под УФ-светом, показывая вам, где именно полосы внутри геля. Несмотря на свое преимущество, недостатком является то, что бромид этидия является потенциальным канцерогеном, поэтому с ним нужно обращаться с большой осторожностью.

SYBR Gold

Краситель SYBR Gold можно использовать для окрашивания двух- или одноцепочечной ДНК или для окрашивания РНК. SYBR Gold появился на рынке как одна из первых альтернатив бромистому этидию и считается более чувствительным.

Краситель демонстрирует в 1000 раз большее усиление УФ-флуоресценции, когда он связывается с нуклеиновыми кислотами. Затем он проникает в густые агарозные гели с высоким процентным содержанием и может использоваться в формальдегидных гелях.

Поскольку флуоресценция несвязанной молекулы настолько мала, обесцвечивание не требуется. Обладатель лицензии Molecular Probes также (с момента запуска SYBR Gold) разработал и продает SYBR Safe и SYBR Green, которые являются более безопасными альтернативами бромистому этидию.

SYBR Green

Красители SYBR Green I и II ( опять же, продаются компанией Molecular Probes) оптимизированы для различных целей. Поскольку они связываются с ДНК, они по-прежнему считаются потенциальными мутагенами, и поэтому с ними следует обращаться осторожно.

SYBR Green I более чувствителен к использованию с двухцепочечной ДНК, тогда как SYBR Green II, с другой стороны, лучше всего подходит для одноцепочечной ДНК или РНК. Подобно популярному красителю бромистым этидием, эти высокочувствительные красители флуоресцируют в УФ-свете.

Производитель рекомендует использовать оба SYBR Green I и II с “254 нм эпи-освещением Polaroid 667 black и белая пленка и фотографический фильтр с гелевым окрашиванием SYBR Green “для обнаружения 100 мкг РНК или однонитевой ДНК на полосу.

SYBR Safe

SYBR Safe был разработан как более безопасная альтернатива бромистому этидию и другим красителям SYBR. Это не считается опасными отходами и, как правило, их можно утилизировать через обычные канализационные системы (т. Е.. , в канализацию), потому что испытания на токсичность показывают отсутствие острой токсичности.

Тестирование также показывает, что генотоксичность клеток сирийского эмбриона хомяка (SHE), лимфоцитов человека, клеток лимфомы мыши незначительна или отсутствует. , Или отмечен в тесте AMES. Окрашивание можно использовать с трансиллюминатором синего света, который вызывает меньшее повреждение визуализируемой ДНК и обеспечивает лучшую эффективность для последующего клонирования.

Eva Green

Eva Green – зеленый флуоресцентный краситель, который, как было обнаружено, ингибирует полимеразную цепь Реакция (ПЦР) в меньшей степени, чем у других красителей. Это делает его очень полезным для таких приложений, как количественная ПЦР в реальном времени.

Это также хороший выбор, если вы используете гели с низкой температурой плавления для восстановления ДНК. Он очень стабилен при высоких температурах и сам по себе имеет очень низкую флуоресценцию, но очень флуоресцирует при связывании с ДНК. Ева Грин также продемонстрировала очень низкую цитотоксичность или мутагенность или их отсутствие.

Оцените статью
recture.ru
Добавить комментарий